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1. UGT的外源表达
为了减少糖基化的影响，优先选择原核体系进行表达，为了便于对目标蛋白的定量，需要给目标蛋白加上6*His等亲和标签，具体条件可以根据实际情况进行调整。
宿主细胞选择：植物UGT为可溶蛋白，选择大肠杆菌BL21作为表达宿主。
表达载体构建：将目的基因克隆到原核表达载体pET28a 中，在UGT的C短添加His标签，以方便后续纯化和检测。构建好的载体转化到BL21菌株中。
细胞培养：含有目的基因的大肠杆菌细胞首先接种至5 mL LB+卡那霉素的试管中，37℃培养12-16h。随后按照1%接种量转接至50 mL LB+卡那霉素的三角瓶中。37℃培养至OD600为0.6-0.8。
诱导表达：添加诱导剂IPTG至终浓度为200 mM，18℃，120 rpm诱导18-20 h以诱导目标蛋白的表达。 Tips：根不同UGT的表达情况，后续可适当优化诱导条件，例如诱导时间和诱导剂浓度。
诱导表达：添加诱导剂IPTG至终浓度为200 mM，18℃，120 rpm诱导18-20 h以诱导目标蛋白的表达。 Tips：根不同UGT的表达情况，后续可适当优化诱导条件，例如诱导时间和诱导剂浓度。
细胞裂解：诱导结束后，离心收获表达细胞，加入100 mM pH8.0的PBS缓冲液重悬细胞，使用高压匀浆机破碎细胞。
酶液制备：低温离心，取离心上清液为粗酶液。
2. UGT标准化功能表征：
UGT通常情况下很难通过纯化获得纯蛋白，所以可以用粗酶液进行表征。
粗酶液中UGT的定量，建议基于所带的亲和标签，用点杂交的方法进行测定。
测试环境：
(1) 糖基受体:0.5 mM
(2) 糖基供体：5 mM
(3) 吐温20：1%（可选，根据底物溶解度来确定）
(4) 粗酶液：40 uL
(5) 缓冲液：10ul 100mM PBS pH7.5或者pH 6.5
(6) 去离子水：补充体系到100ul
(7) 反应温度：20-40度
(8) 反应时间：40min
Tips： 如果UGT元件将来在大肠杆菌中使用，则标准标准条件中PBS缓冲液pH为7.5；如果将来在酵母中使用，则标准标准条件中PBS缓冲液pH为6.5。温度也根据使用细胞工厂的发酵温度来确定，一般可以使用30度。一般情况下，40min内UGT反应速度可以基本保持线性；
产物提取：根据底物的理化性质，选择合适的溶剂（如：正丁醇、乙酸乙酯等）从反应体系中萃取反应产物
产物检测：根据产物的理化性质以及灵敏度，选择合适的检测方法，如HPLC和LC-MS等方法。
根据实际结果，计算UGT的比酶活以及Km等各种动力学数据，并上传到元件库